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Gibco 新一代基礎培養(yǎng)基在提高CHO細胞表達方面的應用

Gibco ExpiCHO stable production medium (以下簡稱ExpiCHO SPM) 穩(wěn)定生產(chǎn)型培養(yǎng)基沿用Gibco AGT 專利技術，它是一種無蛋白質(zhì)、無水解物、無生長因子、無任何動物來源成分的一款化學成分限定的培養(yǎng)基， ExpiCHO SPM支持從瞬轉(zhuǎn)到穩(wěn)轉(zhuǎn)的簡單過渡，提供細胞高表達量而不需要額外的培養(yǎng)基優(yōu)化，既可以作為單克隆培養(yǎng)基，提高單克隆的形成率，也適應于所有CHO細胞的大規(guī)模批量培養(yǎng)。


目前ExpiCHO SPM培養(yǎng)基已成功應用于生物制藥領域中CHO細胞的大規(guī)模批量培養(yǎng)，ExpiCHO SPM適用于不同的CHO細胞類型，如Horizon HD-BioP3，CHO-K1， Lonza‘s CHOK1SV GS-KO, CHO-S等細胞系。
Case #1：ExpiCHO SPM在Horizon HD-BioP3某克隆細胞系上的應用
細胞系：Horizon HD-BioP3;
培養(yǎng)基：Gibco ExpiCHO SPM ，Gibco Dynamis， Medium A 和Feed A (來自供應商C)
培養(yǎng)方式：Batch & Fed-batch
實驗結(jié)果分析：


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Fig 1, Horizon HD-BioP3細胞在batch實驗中的生長曲線


由圖1可以得知，在Batch實驗中，Horizon HD-BioP3細胞在ExpiCHO SPM和Dynamis兩種培養(yǎng)基中的細胞密度最高分別可達13.2*106 cells/ml和13.8*106cells/ml，細胞活率在第6天時均大于98%；

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 Fig 2, Horizon HD-BioP3細胞在fed-batch實驗中的生長曲線


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Fig 3，不同培養(yǎng)基條件下D14的titer值


由圖2可以得知，細胞在Dynamis + Feed A和ExpiCHO SPM + Feed A培養(yǎng)基中組合培養(yǎng)基中的細胞生長都很好，細胞密度最高分別可達38.6*106cells/mL和37.9*106cells/mL，而在Medium A+ feed A的細胞生長略遜于Dynamis + Feed A和ExpiCHO SPM + Feed A；從細胞表達產(chǎn)量看（Fig 3），細胞在ExpiCHO SPM+ Feed A中D14的titer最高，其值為4191mg/L,比Dynamis+ Feed A組的titer高了27%，比Medium A + Feed A 的titer高了76.3%；這說明ExpiCHO SPM在提升蛋白表達方面有著明顯的優(yōu)勢。


Case# 2, ExpiCHOSPM在 某CHO-K1細胞系上的應用
細胞：CHO-K1， 來源ATCC
培養(yǎng)方式：Fed-batch
培養(yǎng)基：ExpiCHO SPM， Medium A和Feed A（來自供應商C）,
補糖策略：低于4g/L時補至6g/L
實驗結(jié)果分析：


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Fig 4, 細胞生長曲線


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Fig 5, 細胞蛋白表達Titer


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Fig 6，細胞培養(yǎng)過程中代謝參數(shù)


由圖4-6可以得知，CHO-K1細胞株在Expi CHO中的細胞生長，蛋白產(chǎn)量和代謝參數(shù)與Medium A相比都更優(yōu)異，其中，與Medium A相比，提前兩天達到最高細胞密度，最高細胞密度為18.8*106，較Medium A高36%，D14的titer為7.046g/L，比在Medium A中的提高了約10%； 此外，細胞在ExpiCHO SPM培養(yǎng)基中的乳酸代謝含量可以控制在很低的水平（小于0.2g/L）,可以使細胞處于一個比較良好的生長環(huán)境中。


Case#3，ExpiCHO SPM在某 CHO-S細胞系表達融合蛋白的應用
細胞株：ExpiCHO-S
培養(yǎng)方式：Batch
培養(yǎng)基：ExpiCHO SPM ，ExpiCHO expression medium ，CD CHO medium ，Medium A/B/C/D/E/F（來自不同的供應商）


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Fig 7， 細胞在不同培養(yǎng)基中的細胞密度和活率


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Fig 8，細胞在不同培養(yǎng)基中的蛋白表達



由圖7和圖8可知，在Batch實驗中，相較其它培養(yǎng)基而言，該細胞在ExpiCHO SPM中的細胞表現(xiàn)最好，titer可達1.348g/L。

通過以上3個案例說明，ExpiCHO SPM 培養(yǎng)基在細胞生長和細胞蛋白表達方面都有著優(yōu)異的表現(xiàn)。此外，它在用于培養(yǎng)Lonza  CHOK1SV GS-KO細胞系時，還可以縮短細胞的倍增時間，提升抗體產(chǎn)物的質(zhì)量（如可降低雙抗分子的錯配率等）�？傊�，ExpiCHO SPM是一款適用于CHO細胞大規(guī)模培養(yǎng)的高表達的性能優(yōu)良的培養(yǎng)基，可以有效地賦能CHO細胞生產(chǎn)高表達高質(zhì)量的蛋白產(chǎn)物。

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